?有趣的是，VEGF 和基质硬化都有效地导致血管通透性。为了进一步表征抗 RAS 药物对血管完整性的作用，我们通过对紧密连接蛋白 ZO-1（封闭小带1）进行免疫染色分析了它们对EC 连接稳定性的影响。虽然建议贝伐单抗治疗导致消除未成熟血管，但我们观察到贝伐单抗对 ZO-1 紧密连接没有变化（图A-B）。与之前在其他疾病模型中的发现一致，即增加基质刚度可增强内皮通透性，我们还观察到 ZO-1 覆盖率与 CRC LM 的组织硬度之间存在负相关，表明在更硬的 LM (图C)。在接受抗 RAS 药物治疗的 Bev-患者中，我们还观察到 EC 中 ZO-1 覆盖率的增加，表明单独的抗 RAS 足以改善内皮连接稳定性（图A，D）。然而，在联合治疗（Bev+和抗 RAS）中，对连接稳定性的影响大大增强（图A，E）。
? KLF2 是一种剪切应力响应转录因子，其表达随层流剪切应力增加，是灌注的标志。抗血管生成治疗没有改变内皮细胞中 KLF2 的表达（图F-G）。然而，KLF2 表达与组织刚度呈负相关，表明基质硬度增加会损害灌注（图H）。在未接受贝伐珠单抗治疗的患者中，KLF2 表达未因抗 RAS 治疗而改变（图F-I），但在抗 RAS 和贝伐单抗治疗的患者中显着更高（图F、J）。
10、内皮细胞YAP/TAZ 是受 LM 基质硬度和VEGF 调节的中枢
?然后我们使用EC 核标记 ERG1 分析了患者样本中的 EC YAP/TAZ 激活状态。抗血管生成治疗导致 YAP/TAZ EC 硬度降低（图K，L），表明 VEGF 信号是 LM 中 EC 中 YAP/TAZ 易位所必需的。然而，与非高血压患者以及接受贝伐珠单抗和非 RAS 药物治疗的患者相比，贝伐珠单抗治疗同时停用 VEGF 的同时降低僵硬度降低了核 YAP/TAZ 强度（图K，N），与 RAS 抑制的类型无关。最相关的是，我们观察到接受 LM 切除术并在疾病过程中接受抗血管生成治疗并同时进行抗 RAS 治疗的患者的 OS 显着延长。 这通过多变量 Cox 回归分析得到证实（图O）。综上所述，抗血管生成治疗联合RAS抑制显着抑制内皮 YAP/TAZ 激活和转移性血管生成。
?研究优点：
①肿瘤受到其微环境的机械特性的影响。利用患者样本和原子力显微镜，我们发现
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